Farebné reakcie bielkovín

Farebné reakcie bielkovín

Téma: Farebné reakcie bielkovín

Úloha: a) Dokážte peptidovú väzbu v roztoku vajcového bielka biuretovou reakciou, obdobný pokus uskutočnite s močovinou

1. b) Uskutočnite xantoproteínovú reakciu

BIURETOVÁ REAKCIA BIELKOVINY A MOČOVINY

Princíp: Dôkazom peptidovej väzby -CO-NH- je Biuretova reakcia (10% NaOH, 0,5% CuSO₄) - bielkoviny dávajú v alkalickom prostredí s iónmi Cu²⁺ farebný komplex. Intenzita zafarbenia závisí od molekulovej hmotnosti bielkoviny (polypeptidy - fialová, menšie peptidy - červená). Pozitívnu reakciu dáva aj biuret, ktorý vzniká reakciu dvoch molekúl močoviny(H₂N–CO–NH₂), pričom sa uvoľňuje amoniak.

Pomôcky: skúmavky, kahan, stojan s príslušenstvom

Chemikálie: roztok vajcového bielka(bielok zriedime s vodou v pomere 1:10), roztok síranu meďnatého(w=0,5%), roztok hydroxidu sodného(w=10%), kryštalická močovina, kyselina chlorovodíková(w=36%)

Postup: 1. Do skúmavky odmeriame roztok vajcového bielka (1 cm³)

1. Pridáme roztok CuSO₄ (0,2 cm³) a roztok NaOH (1 cm³)
2. Obsah skúmavky pretrepeme a pozorujeme vznik modrofialového

sfarbenia.

Podobný pokus môžeme urobiť s močovinou

1. Kryštalickú močovinu(0,5 g) zohrievame v suchej skúmavke slabým plameňom. O chvíľu začne unikať plyn, ktorý identifikujeme čuchom alebo sklenou tyčinkou namočenou v kyseline chlorovodíkovej.
2. Po vychladnutí skúmavky pridáme do zvyšku roztok hydroxidu sodného(1 cm³) a roztok síranu meďnatého (5 kvapiek).
3. Po pretrepaní sa objaví podobné fialkové sfarbenie ako v predchádzajúcom pokuse.

Záver: V oboch prípadoch sme pozorovali modrofialové sfarbenie, čo dokazuje prítomnosť peptidovej väzby v roztoku bielka aj v močovine.

XANTOPROTEÍNOVÁ REAKCIA

Princíp: Reakcia sa používa na dôkaz fenolovej skupiny, ktorú obsahuje napríklad aminokyselina tryptofán.

Pomôcky: skúmavka, kahan, sieťka s azbestom, stojan s príslušenstvom

Chemikálie: Kyselina dusičná (w=45%), roztok amoniaku (w=10%), roztok vajcového bielka

Postup: 1.V skúmavke zohrejeme roztok vajcového bielka (2 cm³) s koncentrovanou kyselinou dusičnou (1cm³).

1. Pozorujeme vznik žltého sfarbenia
2. Do reakčnej zmesi opatrne pridáme roztok amoniaku (asi 2 cm³), reakcia musí byť alkalická.
3. Farba sa zmení na oranžovú.

Záver: Biela až žltá zrazenia sa po pridaní roztoku NaOH sfarbila na oranžovo, čím sme dokázali prítomnosť fenolovej skupiny.